BioVector? 22Δ10α 釀酒酵母多重轉(zhuǎn)運(yùn)體缺失株 / BioVector? 22Δ10α Saccharomyces cerevisiae Multi-Transporter Deletion Strain

通用定義 / General Definition:BioVector? 22Δ10α 是一種經(jīng)過高度工程化改造的釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 缺陷型工具菌株。該菌株的核心特征是其基因組中徹底刪除了 10 個(gè)編碼內(nèi)源性氨基酸通透酶（Amino Acid Permeases / Importers）的主導(dǎo)基因（其中包括最核心的廣譜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體 Gap1，以及 Agp1, Gnp1 等）。由于失去了這些關(guān)鍵的輸入通道，22Δ10α 菌株無法主動(dòng)攝取培養(yǎng)基中的多種天然氨基酸作為其生存所需的唯一氮源。這一獨(dú)特的“空白背景”使其成為植物學(xué)、人類醫(yī)學(xué)及合成生物學(xué)領(lǐng)域中，用來異源表征、功能鑒定以及定量分析外源未知氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（尤其是植物通透酶如 AAP, UMAMIT 家族）的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)胞內(nèi)異源表達(dá)平臺(tái)。

BioVector? 22Δ10α is a highly engineered, multi-deletional Saccharomyces cerevisiae tool strain. The defining feature of this strain is the systematic deletion of 10 major endogenous amino acid permease/importer genes from its genome (including the broad-specificity transporter Gap1, along with Agp1, Gnp1, and others). Lacking these vital uptake pathways, 22Δ10α is unable to import multiple natural amino acids as a sole nitrogen source. This distinct "blank-slate" metabolic background establishes it as an international standard in-cell platform for the heterologous characterization, functional validation, and kinetic analysis of foreign, uncharacterized amino acid transport proteins (particularly plant amino acid permeases such as the AAP and UMAMIT families).

BioVector? 22Δ10α 技術(shù)參數(shù) (Technical Specifications)

1. 基因型與轉(zhuǎn)運(yùn)體缺失譜

• 種屬背景： 釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 實(shí)驗(yàn)室單倍體衍生株。

• 交配型： alpha 型 (MATalpha)。

• 主要缺失基因 (10個(gè)氨基酸通透酶)：

  • GAP1： 廣譜氨基酸通透酶（General Amino Acid Permease），在缺乏優(yōu)良氮源時(shí)活化。

    
    

  • AGP1, GNP1： 負(fù)責(zé)谷氨酰胺、天冬酰胺等極性/大分子氨基酸的吸收。

  • BAP2, TAT1, TAT2： 負(fù)責(zé)支鏈氨基酸（亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸）和芳香族氨基酸（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸）的攝取。

  • 以及其他 4 個(gè)輔助或特異性通透酶基因： 導(dǎo)致細(xì)胞整體的氨基酸主動(dòng)吸收通量降至極低。

• 營(yíng)養(yǎng)缺陷標(biāo)記： 通常保留經(jīng)典的輔助標(biāo)記（如 ura3 缺陷），以便利用酵母表達(dá)質(zhì)粒（如 pYES2, pDR196 等）導(dǎo)入外源目的基因進(jìn)行篩選。

2. 培養(yǎng)與表型特征

• 基礎(chǔ)生長(zhǎng)： 在含有優(yōu)質(zhì)可利用氮源（如銨鹽 / Ammonium Sulfate）的常規(guī) YNB (Yeast Nitrogen Base) 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)完全正常。

• 表型篩選試驗(yàn) (Growth Assay)：

  核心原理： 當(dāng)將銨鹽替換為某種特定氨基酸（例如脯氨酸、谷氨酸或異亮氨酸）作為唯一的氮源時(shí)，22Δ10α 空白菌株表現(xiàn)為不生長(zhǎng)或生長(zhǎng)極度極度緩慢。

• 功能互補(bǔ)： 當(dāng)該菌株轉(zhuǎn)染了成功表達(dá)外源有效氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的質(zhì)粒后，轉(zhuǎn)運(yùn)體能夠?qū)⑴囵B(yǎng)基中的氨基酸攝入胞內(nèi)供酵母使用，從而恢復(fù)（Rescue）酵母在以該氨基酸為唯一氮源的平板上的生長(zhǎng)能力。

主要科研應(yīng)用 (Research Applications)

1. 植物氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體 (Plant Transporter) 的功能鑒定

• 功能確證： 克隆擬南芥、水稻、作物或模式植物的未知轉(zhuǎn)運(yùn)體基因（如 AAP 家族、LHT 家族、UMAMIT 家族），轉(zhuǎn)入 22Δ10α。若酵母恢復(fù)生長(zhǎng)，即可證明該植物蛋白具備跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)特定氨基酸的功能。

  
  

2. 運(yùn)載動(dòng)力學(xué)與親和力測(cè)定 (Kinetic Characterization)

• 放射性同位素標(biāo)記分析： 利用 22Δ10α 背景，排除酵母自身內(nèi)源轉(zhuǎn)運(yùn)體的龐雜背景干擾，精準(zhǔn)測(cè)定外源轉(zhuǎn)運(yùn)體對(duì) 碳-14 或 氚 標(biāo)記氨基酸的攝取速率、飽和常數(shù) (Km) 以及最大轉(zhuǎn)運(yùn)速率 (Vmax)。

3. 氨基酸外排/分泌蛋白 (Exporters) 研究

• 外排表征： 該菌株因內(nèi)部氨基酸代謝積聚且無法回收，也常被用于研究介導(dǎo)氨基酸胞外釋放的轉(zhuǎn)運(yùn)泵功能。

實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) (Experimental Guidelines)

• 對(duì)照組設(shè)置（極其重要）：

  • 陰性對(duì)照： 必須轉(zhuǎn)染空載質(zhì)粒（Empty Vector）的 22Δ10α，確保其在以目標(biāo)氨基酸為唯一氮源的平板上不長(zhǎng)。

  • 陽(yáng)性對(duì)照： 在含有硫酸銨（Ammonium Sulfate）的平板上培養(yǎng)，證明轉(zhuǎn)化后的酵母本身生活力沒有受損。

• 微量生長(zhǎng)污染： 某些特定的氨基酸在高濃度下可能會(huì)通過細(xì)胞膜的微量被動(dòng)擴(kuò)散或未完全敲除的極為微弱的次級(jí)通透酶漏進(jìn)胞內(nèi)，導(dǎo)致陰性對(duì)照出現(xiàn)微弱的草席狀本底生長(zhǎng)。因此，篩選平板上的氨基酸濃度必須經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格梯度優(yōu)化（通常在 1 到 5 mM 之間）。

• 轉(zhuǎn)化效率： 10重基因缺失使該菌株的細(xì)胞壁/膜狀態(tài)較常規(guī)野生型更為脆弱，進(jìn)行醋酸鋰（LiAc）轉(zhuǎn)化法時(shí)，建議熱激時(shí)間和溫度嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程操作，避免過度熱死細(xì)胞。

技術(shù)指標(biāo) (Technical Data Summary)

注意 / Note: 在轉(zhuǎn)運(yùn)體研究的演進(jìn)中，22Δ10α 是繼 22Δ8AA 菌株之后開發(fā)的更徹底的迭代型號(hào)，增刪了部分具有交叉重疊轉(zhuǎn)運(yùn)功能的底物通道，極大地提高了對(duì)諸如丙氨酸、甘氨酸等小分子和復(fù)雜氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體鑒定的準(zhǔn)確度。

BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌株細(xì)胞蛋白抗體基因保藏中心

電話:400-800-2947

工作QQ/微信同號(hào):1843439339

網(wǎng)址

http://www.nedfriskphoto.com