BioVector? pcDNA3.1-HA-SOST 過(guò)表達(dá)質(zhì)粒 / BioVector? pcDNA3.1-HA-SOST Overexpression Plasmid

通用定義 / General Definition:BioVector? pcDNA3.1-HA-SOST 是一種用于在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高效表達(dá) SOST (Sclerostin) 蛋白的重組真核表達(dá)質(zhì)粒。該載體以經(jīng)典的 pcDNA3.1(+) 為骨架，利用強(qiáng)大的 CMV 啟動(dòng)子 驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。在 SOST 基因的 N 端或 C 端融合了一個(gè) HA (Hemagglutinin) 標(biāo)簽，便于利用抗 HA 抗體通過(guò)免疫印跡 (WB)、免疫沉淀 (IP) 或免疫熒光 (IF) 檢測(cè) SOST 蛋白的表達(dá)與定位。SOST 是一種由骨細(xì)胞分泌的糖蛋白，是 Wnt 信號(hào)通路 的重要抑制因子，在骨代謝和骨質(zhì)疏松研究中具有核心地位。

BioVector? pcDNA3.1-HA-SOST is a recombinant eukaryotic expression plasmid designed for the high-level production of SOST (Sclerostin) protein in mammalian cells. Built on the classic pcDNA3.1(+) backbone, it utilizes the powerful CMV promoter for robust transcription. An HA (Hemagglutinin) tag is fused to either the N- or C-terminus of the SOST gene, enabling easy detection and purification via Western Blotting (WB), Immunoprecipitation (IP), or Immunofluorescence (IF) using anti-HA antibodies. SOST is an osteocyte-secreted glycoprotein that acts as a potent inhibitor of the Wnt signaling pathway, making it a pivotal target in bone metabolism and osteoporosis research.

BioVector? pcDNA3.1-HA-SOST 技術(shù)參數(shù) (Technical Specifications)

1. 載體核心元件

• 啟動(dòng)子：CMV (Cytomegalovirus) 啟動(dòng)子，在多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞（如 HEK293, MC3T3-E1, COS-7）中具有極高的轉(zhuǎn)錄活性。

• 目的基因：SOST (Sclerostin)，通常源自人 (Human) 或小鼠 (Mouse) 序列。

• 融合標(biāo)簽：HA-tag (YPYDVPDYA)，用于蛋白質(zhì)示蹤和親和純化。

• 選擇標(biāo)記：

  • 真核：Neomycin/G418，用于篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。

  • 原核：Ampicillin (氨芐青霉素)，用于大腸桿菌中的質(zhì)粒擴(kuò)增。

• 復(fù)制子： pUC origin (高拷貝)。

2. 蛋白功能背后的生物學(xué)

SOST 通過(guò)結(jié)合 LRP5/6 受體，阻止 Wnt 配體與其結(jié)合，從而抑制成骨細(xì)胞的分化和骨形成。通過(guò)該質(zhì)粒過(guò)表達(dá) SOST，可以模擬骨硬化癥或研究骨量下降的分子機(jī)制。

主要科研應(yīng)用 (Research Applications)

1. Wnt 信號(hào)通路抑制研究

• 報(bào)告基因檢測(cè)： 將 pcDNA3.1-HA-SOST 與 TOPFlash 熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，觀察 SOST 對(duì) Wnt 通路活性的定量抑制效果。

2. 骨代謝分子機(jī)制

• 成骨分化抑制： 在 MC3T3-E1 或原代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 (BMSCs) 中過(guò)表達(dá) SOST，研究其對(duì) Runx2、ALP 和骨鈣素表達(dá)的影響。

3. 蛋白相互作用 (Co-IP)

• 受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)： 利用 HA 標(biāo)簽進(jìn)行免疫沉淀，驗(yàn)證 SOST 與 LRP5/6 或 LRP4 的相互作用強(qiáng)度及位點(diǎn)。

4. 分泌蛋白研究

• 上清檢測(cè)： SOST 是分泌型蛋白。轉(zhuǎn)染后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，通過(guò) HA 抗體檢測(cè)分泌到胞外的 SOST 含量。

實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) (Experimental Guidelines)

• 轉(zhuǎn)染效率： 建議使用 HEK293T 細(xì)胞進(jìn)行初期蛋白表達(dá)驗(yàn)證，因其具有極高的轉(zhuǎn)染效率。

• 空載對(duì)照： 實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置 pcDNA3.1-HA (Empty Vector) 作為對(duì)照組，以排除載體本身和轉(zhuǎn)染試劑對(duì)細(xì)胞狀態(tài)的影響。

• 標(biāo)簽位置： 注意 HA 標(biāo)簽是在 N 端還是 C 端。如果 SOST 含有信號(hào)肽，N 端標(biāo)簽應(yīng)置于信號(hào)肽之后，以免在分泌加工過(guò)程中被切除。

• 分泌特性： SOST 蛋白會(huì)分泌到胞外。若 WB 檢測(cè)胞內(nèi)信號(hào)較弱，請(qǐng)嘗試濃縮細(xì)胞培養(yǎng)液上清進(jìn)行檢測(cè)。

技術(shù)指標(biāo) (Technical Data Summary)

注意 / Note: SOST 過(guò)表達(dá)在某些細(xì)胞系中可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或生長(zhǎng)減緩。在建立穩(wěn)轉(zhuǎn)株時(shí)，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳的 G418 篩選濃度。Overexpression of SOST may induce apoptosis or growth retardation in certain cell lines. When establishing stable clones, pre-determination of the optimal G418 concentration (kill curve) is strongly recommended.

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