BioVector? pINA1312 解脂耶羅維亞酵母表達(dá)載體 / BioVector? pINA1312 Yarrowia lipolytica Expression Vector

通用定義 / General Definition:BioVector? pINA1312 是一種專為解脂耶羅維亞酵母 (Yarrowia lipolytica) 開發(fā)的高效表達(dá)載體。作為一種非常規(guī)酵母，Y. lipolytica 以其強(qiáng)大的蛋白質(zhì)分泌能力和脂質(zhì)代謝特性而聞名。pINA1312 載體通常含有強(qiáng)力的單倍體啟動(dòng)子 (pXPR2) 或其衍生物，以及用于高效分泌的信號(hào)肽（如 XPR2 pre-pro 序列）。它常被用于工業(yè)酶制劑、疏水性蛋白質(zhì)以及代謝工程中關(guān)鍵酶的異源表達(dá)。

BioVector? pINA1312 is a specialized expression vector designed for Yarrowia lipolytica, a non-conventional yeast renowned for its exceptional protein secretion capacity and lipid metabolism. The pINA1312 vector typically features a strong promoter (such as the pXPR2 promoter or its derivatives) and an efficient signal peptide (like the XPR2 pre-pro sequence) for extracellular secretion. It is a workhorse for the heterologous expression of industrial enzymes, hydrophobic proteins, and key enzymes in metabolic engineering pathways.

BioVector? pINA1312 技術(shù)參數(shù) (Technical Specifications)

1. 載體核心元件

• 啟動(dòng)子：pXPR2（或改良的準(zhǔn)組成型/誘導(dǎo)型啟動(dòng)子）。XPR2 啟動(dòng)子通常受 pH 和培養(yǎng)基成分（如蛋白胨）誘導(dǎo)。

• 信號(hào)肽：XPR2 pre-pro 序列，確保目的蛋白進(jìn)入分泌途徑。

• 選擇標(biāo)記：

  • 酵母端： 通常為 URA3（尿嘧啶缺陷型篩選）或 LEU2。

  • 細(xì)菌端：Ampicillin (氨芐青霉素 / AmpR)。

• 復(fù)制子：

  • 大腸桿菌端：pMB1 (pBR322) origin。

  • 酵母端：通常為整合型（Integration），通過同源重組整合至染色體，以確保遺傳穩(wěn)定性。

2. 分泌機(jī)制

pINA1312 引導(dǎo)的蛋白質(zhì)翻譯后進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，通過 XPR2 的 pre-pro 序列進(jìn)行多步加工。Pre 序列在進(jìn)入 ER 時(shí)被切除，而 Pro 序列在 Golgi 體中被 KEX2 類蛋白酶切除，最終釋放成熟的蛋白質(zhì)到培養(yǎng)基中。

主要科研應(yīng)用 (Research Applications)

1. 工業(yè)酶制劑生產(chǎn)

• 脂肪酶與蛋白酶： 利用 Y. lipolytica 的天然優(yōu)勢(shì)，大規(guī)模分泌具有高度活性的工業(yè)酶類。

2. 疏水性蛋白表達(dá)

• 膜蛋白與脂質(zhì)相關(guān)酶： 解脂耶羅維亞酵母擁有極其發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)系統(tǒng)，非常適合表達(dá)和折疊復(fù)雜的膜蛋白或需要脂質(zhì)環(huán)境的酶。

3. 代謝工程

• 脂肪酸合成途徑： 引入外源基因以改造酵母的脂質(zhì)合成路徑，生產(chǎn)高價(jià)值脂肪酸或類胡蘿卜素。

實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng) (Experimental Guidelines)

• 宿主菌選擇： 必須使用相應(yīng)的缺陷型宿主菌（如 Po1g, Po1h 或 Polf）。如果載體是 URA3 標(biāo)記，宿主必須是 ura3-。

• 培養(yǎng)基 pH 調(diào)節(jié)：

  重要提示： XPR2 啟動(dòng)子的活性高度依賴于 pH 值。通常在 pH > 6.0 的環(huán)境中活性較高，而在酸性環(huán)境下會(huì)被抑制。

• 整合驗(yàn)證： 轉(zhuǎn)化后，建議通過基因組 PCR 驗(yàn)證目的片段是否成功整合至酵母染色體。

• 多拷貝整合： 在某些情況下，可以通過增加篩選壓力獲得多拷貝整合子，從而顯著提升蛋白產(chǎn)量。

技術(shù)指標(biāo) (Technical Data Summary)

注意 / Note: pINA 系列載體有多個(gè)版本（如 pINA1269, pINA1292 等），主要區(qū)別在于啟動(dòng)子的強(qiáng)弱和篩選標(biāo)記的不同。pINA1312 在需要受控誘導(dǎo)表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)尤為穩(wěn)定。The pINA series includes several variants (e.g., pINA1269, pINA1292). The pINA1312 variant is particularly stable for experiments requiring controlled, inducible expression.

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