BioVector? Hep3B 侖伐替尼耐藥細胞系 / BioVector? Hep3B Lenvatinib-Resistant Cell Line (Hep3B-LR)

通用定義 / General Definition:

BioVector? Hep3B-LR 是通過在含低濃度侖伐替尼 (Lenvatinib) 的培養(yǎng)基中長期梯度誘導培養(yǎng)，從親本 Hep3B（人肝細胞癌細胞系）中篩選出的耐藥亞系。侖伐替尼是一種多靶點受體酪氨酸激酶 (RTK) 抑制劑，主要靶向 VEGFR 1-3、FGFR 1-4、PDGFRα、KIT 和 RET。Hep3B-LR 細胞系不僅對侖伐替尼的半抑制濃度 (IC50) 顯著高于親本細胞，且通常表現(xiàn)出增強的侵襲能力、上皮-間充質轉化 (EMT) 特征以及激活的旁路信號通路（如 EGFR、MET 或 PI3K/Akt 信號的上調）。

BioVector? Hep3B-LR is a resistant subline derived from the parental Hep3B human hepatocellular carcinoma (HCC) cell line through long-term, gradient exposure to Lenvatinib. Lenvatinib is a multi-target receptor tyrosine kinase (RTK) inhibitor that primarily targets VEGFR 1-3, FGFR 1-4, PDGFR alpha, KIT, and RET. Hep3B-LR cells exhibit a significantly higher IC50 for Lenvatinib compared to the parental cells and often demonstrate enhanced invasive potential, Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) characteristics, and activated bypass signaling pathways (such as upregulation of EGFR, MET, or PI3K/Akt).

BioVector? Hep3B-LR 技術參數(shù) (Technical Specifications)

1. 細胞來源與特征

• 親本細胞： Hep3B (HBV 陽性，含整合的乙肝病毒基因組)。

• 耐藥誘導： 采用維持劑量（如 1 uM - 10 uM，視具體批次耐藥倍數(shù)而定）持續(xù)刺激。

• 形態(tài)學： 相比親本細胞，耐藥株可能表現(xiàn)出更明顯的梭形外觀，細胞間隙增大，具有間充質細胞特征。

• 驗證指標：

  • 耐藥指數(shù) (RI)： 通常 RI 大于 5-10 倍。

  • 標志物變化： E-cadherin 表達下降，Vimentin 或 N-cadherin 表達上升。

2. 培養(yǎng)條件

• 基礎培養(yǎng)基： BioVector? MEM 或 DMEM。

• 血清添加： 10% BioVector? 優(yōu)質胎牛血清 (FBS)。

• 耐藥維持： 為保持耐藥表型，培養(yǎng)基中需定期添加特定濃度的侖伐替尼。

• 培養(yǎng)環(huán)境： 37 攝氏度，5% 二氧化碳。

• 傳代策略： 1:3 至 1:4 比例傳代。耐藥株的倍增時間通常比親本細胞稍長。

主要科研應用 (Research Applications)

1. 耐藥機制研究

• 旁路激活： 研究 FGFR 信號被抑制后，細胞如何通過激活 HGF/MET 或 HER3 信號通路實現(xiàn)免疫逃逸。

• 表觀遺傳調控： 探索微 RNA (miRNA) 或長鏈非編碼 RNA (lncRNA) 在調控侖伐替尼敏感性中的作用。

2. 聯(lián)合用藥篩選

• 增敏實驗： 尋找能夠逆轉耐藥的聯(lián)合用藥方案，例如侖伐替尼聯(lián)合 PD-1 抑制劑、MEK 抑制劑或自噬抑制劑。

• 二線藥物評價： 評估新型激酶抑制劑對侖伐替尼耐藥細胞的殺傷活性。

3. 動物模型構建

• 耐藥異種移植 (CDX)： 將 Hep3B-LR 植入裸鼠皮下或原位，建立用于體內藥效評估的耐藥腫瘤模型。

實驗操作注意事項 (Experimental Guidelines)

• 藥物清除期： 在進行正式的藥敏實驗前，通常需要將細胞置于無藥培養(yǎng)基中培養(yǎng) 2-3 天（Drug-free period），以消除培養(yǎng)基中殘留藥物對實驗結果的干擾。

• 定期鑒定： 建議每隔 5-10 代通過 MTT 或 CCK-8 法重新測定 IC50 值，確保耐藥表型未發(fā)生丟失。

• 凍存建議： 使用含 10% DMSO、40% FBS 和 50% 基礎培養(yǎng)基的凍存液，并在凍存管中記錄當前的藥物維持濃度。

技術指標 (Technical Data Summary)

注意 / Note: 由于 Hep3B 細胞系含有 HBV 序列，必須在生物安全二級 (BSL-2) 環(huán)境下操作。侖伐替尼耐藥株的構建是一個動態(tài)過程，不同實驗室誘導出的株系可能在激活的旁路途徑上存在差異。

Since the Hep3B line contains HBV sequences, it must be handled under BSL-2 conditions. The generation of Lenvatinib-resistant sublines is a dynamic process; sublines from different labs may vary in the specific bypass pathways they activate.

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