BioVector? Myc2+AD 酵母雙雜交激活域融合質(zhì)粒 / BioVector? Myc2+AD Yeast Two-Hybrid Activation Domain Fusion Plasmid

通用定義 / General Definition:BioVector? Myc2+AD 是一種專門用于酵母雙雜交 (Y2H) 實驗的重組質(zhì)粒。它將植物中關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子 Myc2 與轉(zhuǎn)錄激活域（Activation Domain, 簡稱 AD，通常源自 GAL4 或 VP16）融合在一起。Myc2 是茉莉酸 (Jasmonate, JA) 信號通路中的核心調(diào)控蛋白，控制著植物的防御反應、生長發(fā)育和次生代謝。該質(zhì)粒通常被用作“獵物 (Prey)”載體，用來檢測 Myc2 與其他候選蛋白（如 JAZ 抑制蛋白）之間的相互作用。

BioVector? Myc2+AD is a recombinant plasmid specifically designed for Yeast Two-Hybrid (Y2H) assays. It features the plant master transcriptional regulator Myc2 fused to a transcriptional Activation Domain (AD, typically from GAL4 or VP16). Myc2 is a central hub in the Jasmonate (JA) signaling pathway, governing plant defense, growth, and secondary metabolism. This plasmid is commonly used as a "Prey" vector to investigate protein-protein interactions between Myc2 and potential partners, such as JAZ repressor proteins.

BioVector? Myc2+AD 技術(shù)參數(shù) (Technical Specifications)

1. 質(zhì)粒結(jié)構(gòu)特征

• 融合形式： AD-Myc2 (激活域位于 Myc2 的 N 端或 C 端)。

• 骨架載體： ?；?pGADT7 或 pAD-GAL4。

• 啟動子： ADH1 啟動子（在酵母中組成型表達）。

• 篩選標記：

  • 酵母： LEU2 (使其能在缺乏亮氨酸的培養(yǎng)基上生長)。

  • 大腸桿菌： Ampicillin (氨芐青霉素)。

• 來源物種： 通常為擬南芥 (Arabidopsis thaliana) 或番茄 (Solanum lycopersicum) 的 Myc2 序列。

2. 核心功能

• 蛋白互作檢測： 當 Myc2+AD 與含有目標蛋白的 DNA 結(jié)合域 (BD) 質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)化到酵母菌株（如 AH109 或 Y2HGold）中時，如果兩者發(fā)生物理結(jié)合，AD 就會靠近啟動子，驅(qū)動報告基因（如 HIS3, ADE2, LacZ）的表達。

主要科研應用 (Research Applications)

1. 茉莉酸信號通路研究

• JAZ-Myc2 相互作用： 驗證 JAZ 蛋白是否在沒有信號刺激時結(jié)合并抑制 Myc2 的活性。

• 輔激活因子鑒定： 尋找與 Myc2 結(jié)合并協(xié)同調(diào)控下游基因轉(zhuǎn)錄的新蛋白。

2. 轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)映射

• 復合體組裝： 研究 Myc2 如何與其他轉(zhuǎn)錄因子（如 MYB, bHLH 家族成員）形成異源二聚體。

實驗操作指南 (Experimental Guidelines)

1. 轉(zhuǎn)化與篩選

• 酵母轉(zhuǎn)化： 使用醋酸鋰法將 Myc2+AD 與相應的 BD 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化。

• 雙缺培養(yǎng)基 (SD/-Leu/-Trp)： 驗證轉(zhuǎn)化是否成功。

• 多缺培養(yǎng)基 (SD/-Leu/-Trp/-His/-Ade)： 驗證蛋白之間是否存在相互作用。

2. 對照設(shè)置

• 陰性對照： AD-Myc2 + 空白 BD 載體（排除 Myc2 的自激活作用）。

• 陽性對照： 使用已知互作的對，如 pGADT7-T + pGBKT7-53。

技術(shù)指標 (Technical Data Summary)

注意 / Note: 由于 Myc2 自身具有轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域，將其克隆在 BD 載體上時常會產(chǎn)生嚴重的自激活現(xiàn)象。因此，在酵母雙雜交實驗中，將 Myc2 構(gòu)建在 AD 載體（即 Myc2+AD）上是更為常規(guī)且可靠的選擇。Since Myc2 possesses its own intrinsic transcriptional activation domain, placing it in a BD vector often results in high auto-activation. Consequently, constructing Myc2 in an AD vector (Myc2+AD) is the standard and more reliable approach for Yeast Two-Hybrid experiments.

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