BioVector? E. coli MKH13 電轉(zhuǎn)化專(zhuān)用感受態(tài)菌株 / BioVector? E. coli MKH13 Electroporation-Grade Strain

通用定義 / General Definition:

BioVector? MKH13 是一種經(jīng)過(guò)特殊遺傳改造的大腸桿菌 (E. coli) 衍生菌株，專(zhuān)門(mén)用于高效率的電轉(zhuǎn)化 (Electroporation)。該菌株最初源自 MC1061 菌株（$hsdR^-$, $mcrB^-$），并針對(duì)大型質(zhì)粒的攝取和復(fù)雜文庫(kù)的構(gòu)建進(jìn)行了優(yōu)化。MKH13 具有極高的轉(zhuǎn)化效率和優(yōu)良的生長(zhǎng)特性，特別是在需要處理高鹽分 DNA 樣本或構(gòu)建超大規(guī)模 cDNA/基因組文庫(kù)時(shí)，它是科研實(shí)驗(yàn)室的常用選擇。

BioVector? MKH13 is a genetically engineered E. coli strain specifically optimized for high-efficiency electroporation. Originally derived from the MC1061 background ($hsdR^-$, $mcrB^-$), this strain has been further refined for the uptake of large plasmids and the construction of complex genetic libraries. MKH13 is characterized by its superior transformation efficiency and robust growth kinetics. It is an ideal host for demanding applications such as the construction of ultra-large cDNA or genomic libraries and the transformation of DNA samples with non-ideal purity.

BioVector? MKH13 技術(shù)規(guī)格 (Technical Specifications)

1. 基因型 (Genotype)

F- araD139 Δ(ara-leu)7696 galE15 galK16 Δ(lac)X74 rpsL (StrR) hsdR2 (rK- mK+) mcrA mcrB1

• hsdR2: 缺失限制性?xún)?nèi)切酶系統(tǒng)，防止異源 DNA 被降解，提高轉(zhuǎn)化率。

• mcrA / mcrB1: 缺失甲基化限制系統(tǒng)，允許轉(zhuǎn)化含有甲基化胞嘧啶的 DNA（如來(lái)自哺乳動(dòng)物基因組的 DNA）。

• rpsL (StrR): 具有鏈霉素抗性。

• Δ(lac)X74: 允許進(jìn)行藍(lán)白斑篩選（需配合含有 lacZ 補(bǔ)體的載體）。

2. 主要特性 (Key Features)

• 高轉(zhuǎn)化效率: 電轉(zhuǎn)化效率通?？蛇_(dá) $1 \times 10^{10} \text{ cfu/μg}$ 質(zhì)粒 DNA。

• 大型載體兼容性: 能夠穩(wěn)定容納和擴(kuò)增大于 10 kb 的大型質(zhì)?；?BAC 載體。

• 背景干凈: 極低的自發(fā)突變率，確?？寺〉囊恢滦浴?/p>

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用指南 (Experimental Guidelines)

1. 應(yīng)用領(lǐng)域 (Applications)

• 文庫(kù)構(gòu)建: 構(gòu)建高覆蓋度的 TALE 或 CRISPR 文庫(kù)、cDNA 文庫(kù)及全基因組文庫(kù)。

• 難轉(zhuǎn)化質(zhì)粒: 用于轉(zhuǎn)化超螺旋程度低或線性化的 DNA 片段。

• 常規(guī)克隆: 替代傳統(tǒng)的化學(xué)轉(zhuǎn)化菌株（如 DH5α），提供更快的轉(zhuǎn)化流程。

2. 轉(zhuǎn)化步驟簡(jiǎn)述 (Transformation Protocol)

1. 預(yù)冷: 將電極皿和 MKH13 感受態(tài)細(xì)胞置于冰上預(yù)冷。

2. 混合: 取 50 μL 感受態(tài)細(xì)胞，加入 1-2 μL DNA（確保脫鹽），輕彈混勻。

3. 電擊: 轉(zhuǎn)移至電擊皿，根據(jù)電轉(zhuǎn)儀設(shè)定參數(shù)（通常為 1.8-2.5 kV）進(jìn)行脈沖。

4. 復(fù)蘇: 立即加入 1 mL SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37°C 振蕩復(fù)蘇 1 小時(shí)。

5. 涂布: 涂布于含相應(yīng)抗生素的平板，37°C 過(guò)夜培養(yǎng)。

技術(shù)指標(biāo) (Technical Data)

注意 / Note: MKH13 具有內(nèi)源性的鏈霉素抗性，因此在選擇篩選標(biāo)記時(shí)請(qǐng)避免使用鏈霉素。為獲得最高轉(zhuǎn)化效率，建議使用微量透析法對(duì) DNA 樣本進(jìn)行脫鹽處理。

MKH13 carries endogenous streptomycin resistance; therefore, avoid using streptomycin as a selection marker for your vectors. For maximum efficiency, ensure your DNA samples are de-salted using microdialysis prior to electroporation.

BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌株細(xì)胞蛋白抗體基因保藏中心

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