BioVector? Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4) Strain

English Version

1. Strain Overview

• Strain Name: BioVector? NTL4(pZLR4)

• ATCC Number: BAA-2240?

• Species:Agrobacterium fabrum (formerly Agrobacterium tumefaciens, Rhizobium radiobacter)

• Type Strain: No

• Biosafety Level: BSL-1

• Year of Origin: 1996

• Depositor: S. Farrand, University of Illinois

• Genome Sequenced: Yes (ATCC Genome Portal)

2. Description and Applications
BioVector? NTL4(pZLR4) is a recombinant bacterial strain derived from Agrobacterium fabrum strain NTL4 via transformation with the recombinant plasmid pZLR4. This strain is specifically engineered to function as a bioreporter for detecting N-acyl homoserine lactone (AHL) quorum-sensing signals.

The strain detects medium- to long-chain AHLs, including:

• C6-AHL, C10-AHL, C12-AHL, C14-AHL

• C6-3-hydroxy-AHL, C8-3-hydroxy-AHL, C10-3-hydroxy-AHL

• All 3-oxo-AHLs (e.g., 3OC6, 3OC8, 3OC10, 3OC12, 3OC14)

3. Genetic Features

Host Strain (NTL4):

• Derived from Agrobacterium fabrum (formerly A. tumefaciens)

• AHL-deficient background

• Suitable recipient for AHL detection assays

Plasmid (pZLR4):

• Size: Not specified in literature

• Resistance Markers: Confers resistance to gentamicin and beta-lactam antibiotics

• Reporter System: Contains an AHL-inducible β-galactosidase (LacZ) gene

• Function: Plasmid carries a traG-lacZ fusion that is activated in the presence of exogenous AHL signals

4. Mechanism of Action
When BioVector? NTL4(pZLR4) encounters AHL molecules (specifically medium- to long-chain AHLs), the following occurs:

1. AHL binds to the TraR regulator protein

2. TraR-AHL complex activates transcription of the traG-lacZ fusion

3. β-galactosidase is produced

4. Enzyme activity can be detected using chromogenic substrates (e.g., X-gal) producing blue color, or quantified via enzymatic assays

5. Growth and Culture Conditions

• Recommended Medium: BioVector? ATCC Medium 1885 (or BioVector? LB-Miller medium supplemented appropriately)

• Temperature: 28°C

• Atmosphere: Aerobic

• Antibiotic Selection: Supplement media with 25 μg/mL gentamicin to ensure plasmid retention

• Growth Time: 48 hours for colony formation

6. Handling and Storage

• Product Format: Freeze-dried

• Storage Conditions:

  • Freeze-dried: 2°C to 8°C

  • Frozen stocks: -80°C or colder

• Revival Procedure:

  1. Rehydrate pellet with 0.5-1.0 mL of BioVector? #1885 broth

  2. Transfer back to 5-6 mL broth tube

  3. Mix well and inoculate additional tubes, slants, or plates

  4. Incubate at 28°C for 48 hours

7. Quality Control

• Verification: Whole-genome sequencing verified

• Genome Size: 5,483,803 bp

• GC Content: 59.12%

• Sterility: Negative for contaminants

8. Applications

• Quorum Sensing Research: Detection and characterization of AHL signals from various bacteria

• Screening AHL-Producing Bacteria: Identification of strains producing medium- to long-chain AHLs

• Quorum Quenching Studies: Evaluating AHL degradation by potential quorum-quenching enzymes or compounds

• Biofilm Research: Studying the role of AHL signals in biofilm formation

• Environmental Monitoring: Detection of AHL signals in environmental samples

BioVector? NTL4(pZLR4) 菌株說明書

中文版本

1. 菌株概述

• 菌株名稱： BioVector? NTL4(pZLR4)

• ATCC編號： BAA-2240?

• 物種：Agrobacterium fabrum（原名 Agrobacterium tumefaciens、Rhizobium radiobacter）

• 模式菌株： 否

• 生物安全等級： BSL-1

• 構(gòu)建年份： 1996年

• 保藏者： S. Farrand，伊利諾伊大學(xué)

• 基因組測序： 已完成（ATCC基因組門戶）

2. 描述與應(yīng)用
BioVector? NTL4(pZLR4) 是通過將重組質(zhì)粒 pZLR4 轉(zhuǎn)化至 Agrobacterium fabrum NTL4 菌株中獲得的重組細(xì)菌菌株。該菌株經(jīng)專門設(shè)計，可用作 檢測 N-?；呓z氨酸內(nèi)酯（AHL）群體感應(yīng)信號的生物報告菌。

該菌株可檢測 中長鏈 AHLs，包括：

• C6-AHL、C10-AHL、C12-AHL、C14-AHL

• C6-3-羥基-AHL、C8-3-羥基-AHL、C10-3-羥基-AHL

• 所有 3-氧代-AHLs（例如 3OC6、3OC8、3OC10、3OC12、3OC14）

3. 遺傳特征

宿主菌株（NTL4）：

• 源自 Agrobacterium fabrum（原名 A. tumefaciens）

• AHL 缺陷型背景

• 適用于 AHL 檢測實驗的受體菌

質(zhì)粒（pZLR4）：

• 大小： 文獻中未具體說明

• 抗性標(biāo)記： 賦予 慶大霉素 和 β-內(nèi)酰胺類抗生素 抗性

• 報告系統(tǒng)： 包含 AHL 誘導(dǎo)型 β-半乳糖苷酶（LacZ） 基因

• 功能： 質(zhì)粒攜帶 traG-lacZ 融合基因，在遇到外源 AHL 信號時被激活

4. 作用機制
當(dāng) BioVector? NTL4(pZLR4) 遇到 AHL 分子（特別是中長鏈 AHLs）時，發(fā)生以下過程：

1. AHL 與 TraR 調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合

2. TraR-AHL 復(fù)合物激活 traG-lacZ 融合基因的轉(zhuǎn)錄

3. 產(chǎn)生 β-半乳糖苷酶

4. 可使用顯色底物（如 X-gal）檢測酶活性，產(chǎn)生藍(lán)色，或通過酶學(xué)實驗進行定量檢測

5. 生長與培養(yǎng)條件

• 推薦培養(yǎng)基： BioVector? ATCC Medium 1885（或適當(dāng)補充的 BioVector? LB-Miller 培養(yǎng)基）

• 溫度： 28°C

• 需氧條件： 需氧

• 抗生素篩選： 培養(yǎng)基中添加 25 μg/mL 慶大霉素 以確保質(zhì)粒保持

• 生長時間： 菌落形成需 48 小時

6. 處理與儲存

• 產(chǎn)品形式： 凍干粉

• 儲存條件：

  • 凍干粉：2°C 至 8°C

  • 冷凍保存：-80°C 或更低溫度

• 復(fù)蘇步驟：

  1. 用 0.5-1.0 mL BioVector? #1885 肉湯重新水化沉淀

  2. 轉(zhuǎn)移回 5-6 mL 肉湯管中

  3. 充分混勻，接種額外的肉湯管、斜面或平板

  4. 28°C 培養(yǎng) 48 小時

7. 質(zhì)量控制

• 驗證： 經(jīng)全基因組測序驗證

• 基因組大?。?/span> 5,483,803 bp

• GC含量： 59.12%

• 無菌檢測： 無污染物

8. 應(yīng)用

• 群體感應(yīng)研究： 檢測和表征各種細(xì)菌產(chǎn)生的 AHL 信號

• 篩選 AHL 產(chǎn)生菌： 鑒定產(chǎn)生中長鏈 AHL 的菌株

• 群體淬滅研究： 評估潛在群體淬滅酶或化合物對 AHL 的降解作用

• 生物膜研究： 研究 AHL 信號在生物膜形成中的作用

• 環(huán)境監(jiān)測： 檢測環(huán)境樣品中的 AHL 信號

BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌株細(xì)胞蛋白抗體基因保藏中心

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