BioVector TM pGhost9:ISS1（有時也寫作 pG+host9:ISS1）是一種用于革蘭氏陽性菌（如乳酸菌、鏈球菌）基因失活和轉(zhuǎn)座突變的溫度敏感型穿梭載體。

• 全長大?。?/span> 3,752 bp。

• 復制子：repA (Ts)（溫度敏感型）。該復制子源自 pWV01，在低體溫（30°C）下正常復制，在高體溫（37°C–42°C）下停止復制。

• 選擇標記：紅霉素抗性 (ErmR)。在 E. coli 中的工作濃度通常為 150-200 μg/ml，在革蘭氏陽性宿主中約為 5 μg/ml。

• 轉(zhuǎn)座元件： 攜帶 ISS1（一種插入序列），能夠通過復制性轉(zhuǎn)座機制高效、隨機地整合到宿主染色體中。

• 常用宿主：E. coliMC1061（克隆宿主），以及多種乳酸菌和鏈球菌。

1. 隨機插入突變： 利用 ISS1 的高頻隨機轉(zhuǎn)座特性構(gòu)建突變體庫。

2. 基因敲除/失活： 克隆目標基因的內(nèi)部片段到載體中，通過升溫強制質(zhì)粒發(fā)生單交叉整合 (Single-crossover integration)，從而破壞目標基因。

3. 基因置換： 配合適當?shù)牟呗赃M行無痕或有標記的基因組編輯。

• 轉(zhuǎn)化與擴增： 在 30°C 下進行轉(zhuǎn)化和篩選，以維持質(zhì)粒的游離狀態(tài)。

• 誘導整合： 將培養(yǎng)溫度提升至 37°C 或 40°C，并保持紅霉素壓力。此時質(zhì)粒無法自主復制，只有整合到染色體上的菌株才能存活。

• 效率參考： 在嗜熱鏈球菌中，轉(zhuǎn)座頻率可達約 2 x 10?2。

BioVector TM

• Size: 3,752 bp.

• Replicon:repA (thermosensitive). It replicates at permissive temperatures (30°C) and is lost or forced to integrate at non-permissive temperatures (37°C–42°C).

• Selection Marker:Erythromycin resistance (ErmR); typical working concentration is 200 μg/ml for E. coli and 5 μg/ml for certain Gram-positive hosts.

• Host Strains: Primarily used in lactic acid bacteria; common cloning host is MC1061.

• Mutagenesis Mechanism: Utilizes the ISS1 (Insertion Sequence) element for random, replicative transposition into the host genome.

• Temperature Sensitivity: The plasmid contains a temperature-sensitive version of the pWV01 replication protein (RepA). At 37°C or higher, replication ceases, making it a "suicide" vector unless it integrates into the chromosome.

• Transposition Efficiency: High frequency of transposition (e.g., ~2 x 10?2 in S. thermophilus) with random chromosomal distribution.

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BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌種細胞蛋白抗體基因保藏中心

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