BioVector?pKUT-Tn5-Sm/Sp（通常也被稱為 pUTmini-Tn5 Sm/Sp）是一種用于革蘭氏陰性菌基因組穩(wěn)定整合的自殺型轉(zhuǎn)座子遞送質(zhì)粒。

• 全長(zhǎng)： 約 7,386 bp。

• 載體骨架：pUT 骨架。含有 R6K 復(fù)制起始位點(diǎn) (oriR6K)。該位點(diǎn)依賴pir

  • 蛋白（由 pir 基因編碼）才能啟動(dòng)復(fù)制。由于大多數(shù)目標(biāo)受體菌株不含 pir 基因，質(zhì)粒進(jìn)入受體后無法自我復(fù)制（即“自殺”），從而確保篩選出的抗性菌株均為轉(zhuǎn)座子插入染色體的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

  • 轉(zhuǎn)座酶 (Transposase)： 高活性轉(zhuǎn)座酶基因 (tnp) 位于質(zhì)粒骨架上，但在轉(zhuǎn)座單元之外。這種設(shè)計(jì)保證了轉(zhuǎn)座子一旦跳躍進(jìn)基因組后，由于轉(zhuǎn)座酶基因的丟失，插入位置將保持穩(wěn)定，不會(huì)再次發(fā)生跳躍。

  • 動(dòng)員位點(diǎn)： 包含 oriT（轉(zhuǎn)移起始位點(diǎn)），可通過接合（Conjugation）方式從大腸桿菌供體菌株轉(zhuǎn)移至目標(biāo)細(xì)菌。

  2. 主要應(yīng)用

  • 正向遺傳學(xué)篩查： 用于構(gòu)建隨機(jī)插入突變庫，以鑒定與特定表型（如固氮作用、光合作用等）相關(guān)的基因。

  • 基因組穩(wěn)定整合： 可用于將外源基因或報(bào)告基因穩(wěn)定整合到細(xì)菌染色體中，且在無抗生素壓力下也能保持穩(wěn)定。

  3. 常用菌株

  • 克隆與供體菌株： 必須使用表達(dá)pir蛋白的大腸桿菌，如 JM109 $\lambda

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