BioVector? TOM20-GFP（或 TOMM20-GFP）質(zhì)粒常用于哺乳動物細(xì)胞中的線粒體外膜（OMM）標(biāo)記。該質(zhì)粒將線粒體進(jìn)口受體蛋白 Tom20 與綠色熒光蛋白（GFP）融合，使線粒體網(wǎng)絡(luò)可視化。

• pFX-Tom20-EGFP (#174186)

  • 用途： 在哺乳動物細(xì)胞中高效表達(dá)線粒體靶向的 EGFP。

  • 載體骨架： pFX (哺乳動物表達(dá)載體)。

  • 啟動子： CMV。

  • 篩選標(biāo)記： 新霉素 (Neomycin/G418)。

  • 克隆位點(diǎn)： 5' XhoI / 3' BglII。

  
  

• TOM20-SBP-GFP (#120173)*

  • 特點(diǎn)： 包含截短的 Tom20（1-30 aa）作為靶向序列，并帶有 SBP 標(biāo)簽，用于通過鏈霉親和素控制線粒體定位。

  • 載體骨架： pEGFP-N1。

  • 篩選標(biāo)記： 卡那霉素 (Kanamycin, 50 μg/mL)。

  
  

• 載體名稱： pCMV3-N-GFPSpark。

• 插入基因： 人源 TOMM20 (NM_014765.4)。

• 熒光標(biāo)簽：GFPSpark?（一種改進(jìn)的高亮度綠色熒光蛋白，激發(fā)/發(fā)射峰為 487/508 nm）。

• 抗性標(biāo)記： 潮霉素 (Hygromycin) 用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染篩選；氨芐青霉素 (Ampicillin) 用于細(xì)菌培養(yǎng)。

• 序列驗(yàn)證： 包含 Kozak 共有序列以增強(qiáng)表達(dá)效率。

• 靶向信號 (MTS)： Tom20 的線粒體定位取決于其 N-端跨膜結(jié)構(gòu)域 (TMD) 的適度疏水性和緊隨其后的正電荷殘基（如 Arg, Lys）。

• 分子量信息：

  • TOM20 蛋白： 約 145 個氨基酸，分子量約 16.3 kDa。

  • GFP 標(biāo)簽： 約 238 個氨基酸，分子量約 27 kDa。

  • 融合蛋白： 整體約 43-45 kDa。

  
  

4. 實(shí)驗(yàn)建議

• 轉(zhuǎn)染建議： 建議在細(xì)胞達(dá)到 70-80% 匯合度時進(jìn)行轉(zhuǎn)染，常用轉(zhuǎn)染試劑如 Lipofectamine 或 FuGENE 6。

• 檢測條件：

  • 激發(fā)光： ~488 nm。

  • 發(fā)射光： ~507-510 nm。

  
  

• 測序引物： 常用的測序引物包括 CMV-Forward 和 BGH-Reverse。

• pFX-Tom20-EGFP (BioVector #174186)

  • Purpose: High-level expression of Tom20 fused to EGFP.

  • Backbone: pFX (Mammalian Expression).

  • Total Size: 4,800 bp.

  • Selectable Marker: Neomycin (G418).

  • Promoter: CMV.

  
  

• mPA-GFP-TOMM20-N-10 (BioVector #57158)

  • Purpose: Photoactivatable GFP (mPA-GFP) for dynamic mitochondrial imaging.

  • Localization: Outer Mitochondrial Membrane.

  • Excitation/Emission: 400/504 nm and 515/517 nm.

  
  

• TOM20-SBP-GFP (BioVector #120173)*

  • Insert: Truncated TOM20 (aa 1-30) fused to SBP and eGFP.

  • Tag: C-terminal eGFP.

  
  

• Vector: pCMV3-N-GFPSpark.

• Insert: Human TOMM20 (NM_014765.4).

• Marker: Hygromycin resistance for stable cell line selection.

• Features: Includes a Kozak consensus sequence to enhance expression.

3. Key Molecular Properties

• TOM20 Gene (TOMM20): Encodes a 145 amino acid protein (approx. 16.3 kDa).

• Targeting Signal: The N-terminal transmembrane domain (TMD) of Tom20 is responsible for anchoring to the mitochondrial outer membrane.

• GFP Tag: Standard GFP is approximately 27 kDa, consisting of 238 amino acids.

• Promoter: Most mammalian versions use the CMV promoter for constitutive expression.

• Bacterial Selection: Typically Ampicillin (100 μg/mL).

• Common Primers: T7 (TAATACGACTCACTATAGGG) and BGH Reverse (TAGAAGGCACAGTCGAGG) are often used for sequencing.

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