pHT-XCR6 CRISPR/Cpf1表達(dá)載體-枯草芽孢桿菌多基因編輯和表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)-BioVector NTCC Inc.

一種基于CRISPR Cpf1的枯草芽孢桿菌多基因編輯和表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)。本發(fā)明通過構(gòu)建的Cpf1表達(dá)載體pHT?XCR6和crRNA陣列表達(dá)載體pcrF11，可以一次性完成2個(gè)基因的完全敲除，6個(gè)基因的堿基修飾以及1個(gè)基因的敲入。載體pHT?XCR6上包含NgAgo蛋白，用于促進(jìn)recA介導(dǎo)的同源重組。同時(shí)構(gòu)建了載體pLCg6?dCpf1?remA(用于將DNA酶失活的Cpf1突變體dCpf1和轉(zhuǎn)錄激活因子remA的融合蛋白在枯草芽孢桿菌基因組上的整合表達(dá))和pcra3(用于crRNA陣列在枯草芽孢桿菌基因組上的整合表達(dá))，可以用于同時(shí)對不同基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄抑制和激活。本發(fā)明還建立一種經(jīng)濟(jì)高效的名為SOMACA(Synthetic Oligos Mediated Assembly of crRNA Array)的crRNA陣列組裝方法，可通過合成短單鏈DNA(<60nt)將所需的crRNA陣列插入到載體pcrF11或pcra3上，用于引導(dǎo)Cpf1或dCpf1?remA進(jìn)行基因編輯和表達(dá)調(diào)控。

Map：

BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌株細(xì)胞蛋白抗體基因保藏中心

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