通過構(gòu)建一種特殊的CRISPR/Cas9表達(dá)載體嘗試在所有真菌中建立通用的CRISPR/Cas9體系。此載體包含復(fù)制起點(diǎn)、密碼子優(yōu)化的Cas9、tef1啟動(dòng)子、tef1終止子、SV40核定為信號(hào)、gpdA啟動(dòng)子、TrpC終止子、篩選標(biāo)記(AFUM_pyr G、AN_arg B、bleR和hygR)、鑲嵌在RNA聚合酶Ⅱ合成的較大轉(zhuǎn)錄物中間的gRNA等, 根據(jù)篩選標(biāo)記的不同構(gòu)建了四個(gè)不同的載體用于多種菌種。結(jié)果顯示該體系成功的對(duì)構(gòu)巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)的yA基因、棘孢曲霉的albA和pyrG基因進(jìn)行了突變。此外, 還可以運(yùn)用同一載體在5種不同的曲霉屬菌種中引入albA同源物的特異性突變, 以促進(jìn)在不同絲狀真菌中引入常見突變。