基于Red同源重組和CRISPR/Cas9的銅綠假單胞菌基因組編輯服務(wù)

基于Red同源重組法的銅綠假單胞菌基因組改造

銅綠假單胞菌基因敲除的傳統(tǒng)方法是利用自身的Red系統(tǒng)對外源進(jìn)入的DNA進(jìn)行同源重組，從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的等位替換。通過設(shè)計(jì)靶基因的同源融合片段，將其克隆至自殺載體中，自殺載體通過接合輸入到靶細(xì)菌。通過抗生素篩選細(xì)菌基因組靶位點(diǎn)整合有自殺載體的插入突變株。在第二輪反向選擇壓力下，只有銅綠假單胞菌基因組發(fā)生第二次同源重組并丟失自殺質(zhì)粒才可以存活。

基于CRISPR/Cas9平臺(tái)的銅綠假單胞菌基因組改造

CRISPR/Cas9系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌特有的一種天然防御系統(tǒng),用于抵抗病毒或外源性質(zhì)粒的侵害。BioVector NTCC Inc.推出CRISPR方法進(jìn)行銅綠假單胞菌基因組改造服務(wù)（包括基因敲除、定點(diǎn)突變、定點(diǎn)插入外源序列等）。相比于傳統(tǒng)的基因敲除方法，該方法速度快，無痕；非常便于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。

研究內(nèi)容

• 銅綠假單胞菌基因敲除（Pseudomonas aeruginosa gene knockout）

• 銅綠假單胞菌基因敲入（Pseudomonas aeruginosa gene knockin）

• 銅綠假單胞菌基因點(diǎn)突變（Pseudomonas aeruginosa gene point mutation）

服務(wù)優(yōu)勢

• 無痕編輯

• 多基因編輯：能同時(shí)敲除多達(dá)3個(gè)基因

• 便于篩選：不要求靶細(xì)菌具有抗生素抗性

• 周期快：3周交付

• 定制服務(wù)：模式菌株或者宿主菌株

• 定制服務(wù)：開發(fā)特殊物種的基因組編輯系統(tǒng)

客戶提供信息

• 銅綠假單胞菌宿主菌株信息

• 靶基因的ID或靶序列

下游應(yīng)用

• 抗生素及重要工業(yè)用酶

• 發(fā)現(xiàn)新的基因功能

• 優(yōu)化代謝通路，提升代謝產(chǎn)物產(chǎn)量，實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)

參考文獻(xiàn)：

• Selle K, Barrangou R. Harnessing CRISPR–Cas systems for bacterial genome editing[J]. Trends in microbiology, 2015, 23(4): 225-232.

• Zerbini, F., Zanella, I., Fraccascia, D., K?nig, E., Irene, C., & Frattini, L. F., et al. (2017). Large scale validation of an efficient CRISPR/Cas-based multi gene editing protocol in Escherichia coli. Microbial Cell Factories, 16(1), 68.