NanoLuc螢光素酶技術(shù)

價(jià)　　格：￥2930
貨　　號(hào)：BioVector-NanoLuc
產(chǎn)　　地：北京

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NanoLuc螢光素酶是Promega公司推出一種新型的螢光素酶，它具有分子量更小(19.1kDa， 171個(gè)氨基酸)，發(fā)光更亮，比任何現(xiàn)有的生物發(fā)光酶用途更加廣泛的特點(diǎn)，它是目前性能最好的生物發(fā)光報(bào)告基因之一。NanoLuc?螢光素酶的這些屬性為報(bào)告基因檢測(cè)提供了新的功能，在需要更高靈敏度的復(fù)雜生物學(xué)應(yīng)用中深具潛力。

　　NanoLuc技術(shù)包含一種新型底物 ――furimazine和一種獨(dú)特的酶(NanoLuc?螢光素酶)，前者由Promega公司有機(jī)化學(xué)家開(kāi)發(fā)，后者由Promega公司的研究科學(xué)家利用定向進(jìn)化技術(shù)開(kāi)發(fā)。它具有無(wú)可比擬的小巧體積，可以用于增強(qiáng)的病毒傳遞和蛋白融合，而且它很容易從細(xì)胞中分泌。NanoLuc?螢光素酶比螢火蟲(chóng)(Photinus pyralis)或海腎(Renilla reniformis)螢光素酶的發(fā)光高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，在難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中也能獲得更好表現(xiàn)。此外，NanoLuc可應(yīng)用在更多生理相關(guān)模型中，包括復(fù)雜的生物樣品。NanoLuc螢光素酶簡(jiǎn)單易用――僅需加樣-檢測(cè)，且信號(hào)穩(wěn)定，可以不經(jīng)任何改良，實(shí)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)臺(tái)操作到高通量篩選的規(guī)模放大應(yīng)用。

　　為滿足在“下一代”遺傳報(bào)告基因中的多種應(yīng)用需求，我們提供12個(gè)版本的 NanoLuc螢光素酶質(zhì)粒。產(chǎn)品包括NanoLuc-PEST(NlucP)，它將蛋白表達(dá)水平變化與轉(zhuǎn)錄活性改變密切偶聯(lián)，并增加信噪比。對(duì)于分泌型報(bào)告基因，我們通過(guò)融合N-末端分泌信號(hào)(secNluc)來(lái)制備NanoLuc螢光素酶載體。使用Nano-Glo?螢光素酶檢測(cè)試劑，發(fā)光量在跨越 1,000,000倍的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，且信號(hào)半衰期≥2小時(shí)。

　　手機(jī)拍攝的NanoLuc?螢光素酶發(fā)光信號(hào)。(注：96-孔板中，轉(zhuǎn)染了NanoLuc?螢光素酶載體的HEK293細(xì)胞，50000細(xì)胞/孔)

　　NanoLuc螢光素酶具有許多使之成為出色報(bào)告基因蛋白的物理特性。

說(shuō)明		NanoLuc? (Nluc) luciferase （ NanoLuc? 螢光素酶）是一個(gè)經(jīng)過(guò)基因工程改造的小分子酶（ 19.1kDa ），它是目前性能最好的生物發(fā)光報(bào)告基因。該酶比螢火蟲(chóng)（ Photinus pyralis ）或海腎（ Renilla reniformis ）螢光素酶的發(fā)光亮 100 倍，它使用一種新型底物 ——furimazine，可產(chǎn)生高強(qiáng)度、輝光型發(fā)光。生物發(fā)光反應(yīng)不依賴 ATP ，同時(shí)抑制背景發(fā)光以獲得最高檢測(cè)靈敏度。目前已構(gòu)建多種類型的 NanoLuc? 螢光素酶報(bào)告基因載體，以滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。非融合的 Nluc 提供了最大的光輸出和靈敏度， NanoLuc?-PEST （ NlucP ）將蛋白表達(dá)水平變化與轉(zhuǎn)錄活性改變密切偶聯(lián)，并增加信噪比，融合 N- 末端分泌信號(hào)（ secNluc ）的 NanoLuc? 螢光素酶適用于分泌型報(bào)告基因試驗(yàn)。使用 Nano-Glo? 螢光素酶檢測(cè)試劑，發(fā)光量在跨越 1,000,000 倍的酶濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，且信號(hào)半衰期 ≥2 小時(shí)。
特點(diǎn)		NanoLuc 螢光素酶具有許多使之成為出色報(bào)告基因蛋白的物理特性： ? 分子量非常小，單體酶（ 171 個(gè)氨基酸； 513bp ） ? 熱穩(wěn)定性高（ T m =60 ℃） ? 在很寬的 pH 范圍內(nèi)有活性（ pH 值 6-8 ） ? 沒(méi)有翻譯后修飾或二硫鍵 ? 均勻分布在細(xì)胞中 ? 發(fā)射光譜非常適合于生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（ BRET； λmax =465nm ）。為滿足利用報(bào)告基因研究轉(zhuǎn)錄調(diào)控，我們提供多種表達(dá)不同類型 NanoLuc ?螢光素酶（非融合 Nluc ， PEST 不穩(wěn)定型 NlucP ，分泌型 secNluc ）的質(zhì)粒載體。不同的 pNL 突變體用途如下： ? pNL1 ：克隆已知或預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子區(qū)域 ? pNL2 ：克隆已知或預(yù)測(cè)的啟動(dòng)子區(qū)域，并通過(guò)潮霉素（ Hygromycin ）篩選建立一個(gè)穩(wěn)定克隆的細(xì)胞系 ? pNL3 ：克隆不需要基本啟動(dòng)子的結(jié)合位點(diǎn)或應(yīng)答原件（如 pNL3.2.NF-κB-RE 載體） ? 提供非融合和分泌型 Nluc 對(duì)照質(zhì)粒。 pNL 載體系列以 pGL4 為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)，以方便從現(xiàn)有的質(zhì)粒上進(jìn)行序列轉(zhuǎn)移。載體骨架設(shè)計(jì)還去掉了許多轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和其他潛在的調(diào)控元件以減少反常結(jié)果的發(fā)生。對(duì) Nluc 基因突變體進(jìn)行了密碼子優(yōu)化，并去除了許多潛在調(diào)控元件或其他不必要的功能（如常見(jiàn)的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)）。
操作手冊(cè)		pNL3.2.NF-κB-RE[ NlucP /NF-κB-RE/Hygro] Vector Product Information
相關(guān)產(chǎn)品		FuGENE? HD Transfection Reagent FuGENE? 6 Transfection Reagent pGEM?-3Zf(+/–) Vectors GloMax? 96 Microplate Luminometer GloMax?-Multi+ Detection System with Instinct? Software
應(yīng)用		? 轉(zhuǎn)錄調(diào)控。 ? 病毒 - 細(xì)胞的相互作用。 ? 化合物篩選。 ? 翻譯后修飾。 ? G 蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)。 ? 細(xì)胞信號(hào)。 ? 啟動(dòng)子分析。
儲(chǔ)存條件		儲(chǔ)存于 –20°C 。

Nano-Glo? Luciferase Assay System provides a simple, single-addition reagent that generates a glow-type signal in the presence of NanoLuc? luciferase. The reagent is prepared by mixing Nano-Glo? Luciferase Assay Substrate and Nano-Glo? Luciferase Assay Buffer and contains an integral lysis buffer to use directly on cells expressing NanoLuc? luciferase or culture medium when the luciferase is secreted.
NanoLuc? (Nluc) luciferase is a small (19.1kDa) engineered luminescent reporter. The enzyme is about
150-fold brighter than either firefly (Photinus pyralis) or Renilla reniformis luciferase, using a novel coelenterazine analog (furimazine) to produce high intensity, glow-type luminescence. The luminescent reaction is ATP-independent and designed to suppress background luminescence for maximal assay sensitivity.