pR6K-Tps-cm-inv-hly plasmid vector質(zhì)粒載體

以質(zhì)粒 pR6K-TpsGenta-tetR-T7RP 為模板, 利用引物 IR-loxm-genta-F
和 IR-loxm-genta-R, PCR 擴增 loxm-genta-loxm, SalⅠ/
XbaⅠ雙酶切后膠回收, 同時將質(zhì)粒 pET28a 用 SalⅠ/
XbaⅠ雙酶切后膠回收大片段, 將此片段與膠回收的
PCR 產(chǎn)物過夜連接, 構(gòu)建質(zhì)粒 pET28a-loxm-genta.
在 Red/ET 重組酶的作用下, 將質(zhì)粒 pET28a-loxmgenta 上的 genta 抗性基因替換成 cm 抗性基因, 獲得
重組質(zhì)粒 pET28a-loxm-cm; (ⅱ) SalⅠ/XbaⅠ雙酶切
質(zhì)粒 pET28a-loxm-cm 和 pBlue-inv-hly, 分別獲得
IR-loxm-cm 和 inv-hly 片段, T4 DNA ligase 連接, 電
轉(zhuǎn)化 E. coli GBpir116, 獲得轉(zhuǎn)座質(zhì)粒 pR6K-Tps-cminv-hly

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