基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13 BioVector NTCC質(zhì)粒載體菌種細(xì)胞基因保藏中心
以Streptomyces lividans TK24為表達(dá)宿主,構(gòu)建高效表達(dá)棘白霉素脫酰酶(EchDA)的基因工程菌。方法:從Actinoplanesutahensis NRRL 12052中獲取EchDA的基因片段,連接到鏈霉菌表達(dá)載體pNW-S1,采用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子Plac與組成型啟動(dòng)子PermE*和PSau3A,依次構(gòu)建基因工程菌株ZNW-S11、ZNW-S12和ZNW-S13。通過(guò)分析啟動(dòng)子對(duì)EchDA分泌表達(dá)的影響,確定工程菌的表達(dá)能力,隨后完善發(fā)酵放大的工藝過(guò)程,將工程菌株發(fā)酵放大到300 L發(fā)酵罐水平。結(jié)果:成功實(shí)現(xiàn)了EchDA在S.lividans TK24中的誘導(dǎo)分泌表達(dá);在搖瓶水平,EchDA的酶活可達(dá)到125U/L,在24h內(nèi)可實(shí)現(xiàn)對(duì)15g/L米卡芬凈前體FR901379的完全轉(zhuǎn)化;在300L發(fā)酵罐水平,EchDA的酶活可達(dá)到80U/L,可用于10g/LFR901379的完全轉(zhuǎn)化。當(dāng)前,國(guó)內(nèi)在工業(yè)生產(chǎn)中仍使用原始菌A. utahensis來(lái)表達(dá)EchDA,而開(kāi)發(fā)的EchDA基因工程菌,與之相比在生產(chǎn)效率上有了大幅度提升,有助于改良當(dāng)前棘白霉素類抗生素的生產(chǎn)工藝。
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