GV3101 Chemically Competent Cells 化學感受態(tài)細胞產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品規(guī)格

GV3101 Chemically Competent Cells, 10×200μl

保存條件： -80℃

基因型

C58 (rif ^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent^R/strep^R) Nopaline

產(chǎn)品說明

GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移）。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽：Strep和gent，賦予GV3101菌株鏈霉素和慶大霉素抗性，適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達10⁴cfu/μg。

操作方法

1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

1. 每100μl感受態(tài)加1ug（體積不大于10ul）質(zhì)粒DNA，用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天（當平板只含有50ug/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48h即可；平板中同時加入50ug/ml kan，20ug/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60h；如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h）。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。

2. 混入質(zhì)粒時應輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。